主要用途
FF微孔板使用固定在微孔板上的95个不同的生化试验来对广泛的真菌(包含丝状真菌及酵
母)提供表型概况并进行鉴定。Biolog鉴定系统中的软件(MicrologTM 3)通过读取FF微孔板上
所表现出的表型图谱来对真菌进行鉴定。FF鉴定板适合鉴定新鲜的培养物,对于在斜面培养基
上长久保存或经过多次转代的培养物,常会使表型恶化,或会失去该菌株的生理代谢特征。
概述
Biolog FF微孔板通过微生物对微孔板中的不同碳源的利用及氧化情况进行测试,测试
使得有特征代谢的孔变成紫色或者浊度发生改变,从而使微生物在测试板上显示出“代
谢指纹图谱”1,2。
所有必要的营养物质以及生化试剂都被预先填充、干化在96个孔中。利用碘硝基四唑
紫(Iodonitrotetrazolium Violet)作为颜色指示剂显示利用特定碳源发生氧化反应时线
粒体的活性。
试验的操作过程非常简单。在平板上按照常规方法划线分离需要鉴定的微生物,然后
将分离的到的纯种用棉签挑到一种特殊的“凝胶”接种液(FF-IF)3,4中,配成指定
细胞浓度的菌悬液。将菌悬液按每孔100µl的量加到FF板,菌悬液通常包含孢子和菌
丝片断。当培养时,就会利用到孔中的碳源,会发生下列某一个或两个变化:1,线粒
体活性增加,形成微红-橙色颜色,在490nm处的光密度增加。2,细胞生长,浊度增
加,同时在490nm和750nm处的光密度增加。A1 孔不含碳源,同时作为色度和浊度
的参照孔。
鉴定板一般孵育1-4天。利用MicroStation读数仪在490nm和750nm定量检测每孔的色
度和浊度反应 。Biolog MicrologTM软件通过FF板上显颜色及浊度变化所产生的指纹图
谱自动与数据库比对,寻找符合条件的结果。如果找到匹配的,所分离出来的微生物
得到鉴定
注意事项
为获取准确且可重复的结果,请务必遵循下列建议:
纯培养是一切鉴定的前提,
使用专用培养基进行活化培养非常重要,同一菌株可能会由于接种前在不同的培养基上生
长而在鉴定时产生不同的代谢特征。
无菌操作,避免污染影响结果。
应尽量使用一次性玻璃器皿来处理所有细胞悬液和其他溶液。已经清洗过的玻璃器皿可能
含有微量的皂剂或洗涤剂,会影响到结果。
在使用前将FF微孔板及FF-IF接种液预热到室温。一些菌种对冷冲击非常敏感。
准确校正浊度仪,使菌悬液浓度位于指定的浓度范围。请参考“接种液制备”这一部分内
容。
FF鉴定板上包被的化学物质对温度和光敏感。FF微孔板请置于2-8℃冰箱,避光保存。如
孔颜色为深褐色表示鉴定板碳源已变质。一些孔本身就是黄色或浅红色,这是正常的。
请一定采取安全的方式来处理所有真菌。尽量在无菌间操作,避免污染。尤其是要避免空
气中的孢子(分生孢子)产生交叉污染。避免对仪器或人为的污染。推荐使用II级生物安全
柜。干净、无菌的可替换鉴定板盖有助于减少对MicroStation读数仪的污染风险。
检查 FF 鉴定板:
请勿使用过期的 FF 鉴定板。要将其带着外包装放于 2-8℃冰箱,避光保存。