Gibco11131D/11132D用于T细胞扩增和活化的 Dynabeads™人T活化剂 CD3/CD28

一、产品概述​​

Gibco™ Dynabeads™人T活化剂CD3/CD28是一种磁珠偶联抗体复合物，用于高效激活和扩增人T细胞。该产品通过模拟天然抗原呈递过程（提供CD3和CD28信号），实现T细胞的非特异性活化，广泛应用于免疫治疗研究（如CAR-T、TCR-T）、肿瘤免疫学和体外T细胞功能研究。

二、产品的优势

•无需饲养层细胞即可活化T细胞

•活化细胞仍保留体内类似功能

•获得较大的可重现性，不会受到可溶性抗体或有丝分裂原污染

•实现从100倍到1000倍的T细胞扩增

三、核心特点​​

1.双信号激活​​

磁珠表面共价偶联抗CD3（刺激TCR复合物）和抗CD28（提供共刺激信号），协同促进T细胞活化和增殖，避免细胞凋亡或耐受。

2.高纯度与一致性​​

均一的4.5μm磁珠，表面抗体比例经过优化（CD3:CD28 = 1:1），确保批次间稳定性。

3.无酶解需求​​

无需使用胰蛋白酶或其他酶去除磁珠，减少对细胞的损伤（传统方法需磁珠分离）。

4.兼容多种应用​​

适用于静止T细胞、PBMCs或全血中的T细胞扩增，支持无血清培养基条件。

四、应用领域​​

•CAR-T/TCR-T细胞制备​​

•肿瘤微环境研究​​

•自身免疫疾病模型​​

•疫苗开发中的T细胞应答评估​

五、质量控制​​

1.无菌性：通过内毒素检测（<1 EU/mL）和微生物污染测试。

2.性能验证：每批次经流式细胞术检测，确保≥90%的CD4⁺/CD8⁺T细胞活化（标志物如CD25、CD69上调）。

六、产品规格

七、产品使用说明

1、实验前准备​​

（1）、试剂与材料​​

​​•Dynabeads CD3/CD28（11131D或11132D）

​​•T细胞来源：外周血单个核细胞（PBMCs）、纯化T细胞或全血

​​•培养基：RPMI 1640 + 10% FBS（或无双抗的X-VIVO 15等无血清培养基）

​​•细胞因子：重组人IL-2（推荐终浓度100–300 IU/mL）

​​•辅助试剂：DPBS（无Ca²⁺/Mg²⁺）、0.4%台盼蓝（细胞活性检测）

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（2)、 磁珠预处理​​

​​•轻柔混匀：取出磁珠瓶，轻摇30秒使磁珠均匀悬浮（勿涡旋）。

​​•洗涤（可选）：若需去除保存液，用1mL DPBS重悬磁珠，置于磁力架1分钟，弃上清，重复1次后重悬于培养基中。

2、操作步骤​​

（1）T细胞活化（Day 0）​​

①.细胞计数：分离PBMCs或纯化T细胞（如用CD3/CD28 MicroBeads阴性分选），调整细胞密度至1–2×10⁶/mL。

②.磁珠与细胞共孵育：

  •比例推荐：

​​            常规活化：磁珠:细胞= 1:1（如1×10⁶细胞+1×10⁶磁珠）

​​            高纯度T细胞：可降至1:0.5​​

​​            低反应性细胞（如肿瘤浸润淋巴细胞）：可增至1:2~1:3​​

         •混合体系：将磁珠与细胞在培养基中混合，轻柔吹打均匀。

③.培养条件：37°C、5% CO₂培养箱中静置培养24–48小时。

④.观察活化标志物：24小时后可检测CD25/CD69表达（流式细胞术）。

（2）T细胞扩增（Day 2–14）​​

      ①.补充IL-2：激活24小时后添加IL-2（终浓度100–300 IU/mL）。

      ②.换液与维持：

    •每2–3天半量换液（离心后弃去一半培养基，补充新鲜含IL-2培养基）。

    •维持细胞密度在0.5–2×10⁶/mL（避免过度拥挤）。

     ③.磁珠去除：

    •扩增完成后（通常Day 5–7），将培养物置于磁力架1分钟，吸出上清中的细胞，弃去磁珠。

3、关键优化参数​​

​（1）磁珠比例：初次实验建议测试1:1、1:2、1:3比例，选择扩增效率******者。

​（2）IL-2浓度：过高可能导致Treg细胞扩增，可尝试50–500 IU/mL梯度优化。

​（3）培养基选择：无血清培养基（如X-VIVO 15）可减少批次差异，但需预试细胞适应性。

4、常见问题解答​​

Q1: 磁珠是否需要提前包被？​​

​​否：磁珠已偶联CD3/CD28抗体，直接使用即可。

Q2: 如何判断活化成功？​​

​​形态学：活化后T细胞体积增大，呈母细胞化。

​​标志物检测：CD25（IL-2Rα）、CD69表达上调（流式验证）。

Q3: 磁珠残留如何处理？​​

​​磁性分离：重复磁力架吸附2–3次可去除99%以上磁珠。

5、注意事项​​

•无菌操作：全程在超净台中进行，避免污染。

•避免冻融：磁珠保存于2–8°C，不可冷冻或离心。

•细胞活性监测：扩增期间每日用台盼蓝检测活率（应≥90%）。

•替代方案：如需符合GMP标准，推荐CTS™ Dynabeads™（货号A40203）。

6、预期结果​​

•扩增倍数：7–14天后T细胞数量可增加50–1000倍（取决于起始细胞类型）。

•表型分析：扩增后的T细胞以效应记忆表型（CD45RO⁺CD62L⁻）为主。

八、内容与储存

•Dynabeads™人T活化剂CD3/CD28以悬液的形式提供，由 4×10 ⁷ Dynabeads™/mL的磁珠溶于磷酸盐缓冲盐水(PBS)组成，pH值 7.4，另含0.1%的人血清白蛋白 (HSA)。

•储存条件：2°C至8°C。切勿冷冻。