Gibco™ ExpiFectamine™ CHO 转染试剂盒（货号:A29129）

产品名称:Gibco™ ExpiFectamine™ CHO 转染试剂盒（货号:A29129）
产品货号:A29129
产品规格:1个试剂盒
产品品牌:Gibco
供应商:Gibco
产品产地: 美国产品价格:￥8989
产品说明书:有

　　　　　北京　北京

保存于运输说明：
2~8℃ 避光冷藏

详细信息：

一、产品基础信息

项目	详情
产品全称	ExpiFectamine™ CHO 转染试剂盒 ExpiFectamine™ CHO Transfection Kit
品牌	Gibco
货号	A29129
规格	适配 1 L 细胞培养物
储存条件	2~8℃ 避光冷藏，严禁冷冻

二、产品概述

ExpiFectamine™ CHO 转染试剂盒是 ExpiCHO™ 完整表达系统试剂盒（A29133）的核心配套组分，专为高密度悬浮CHO细胞瞬时转染开发。搭配专属转染增强剂、细胞补料液，可在ExpiCHO-S™细胞（A29127）+ ExpiCHO™表达培养基（A2910001）体系中实现超高重组蛋白表达量。

三、产品核心特性

1. 转染效率优异：高密度悬浮CHO细胞转染效率可达90%以上；

2. 质粒用量大幅降低：相比常规转染试剂，质粒使用量减少1/2~2/3；

3. 方案灵活通用：提供3套瞬时表达方案，兼容FreeStyle™ MAX CHO、Expi293™等主流瞬时表达平台；

4. 结果稳定可重复：批次间转染、蛋白表达数据差异小；

5. 线性放大工艺：1mL微量体系至10L大规模摇瓶均可无缝放大。

试剂盒完整包含3种核心组分：阳离子脂质转染试剂、转染增强剂、细胞补料液，三者协同优化转染与表达效果。

实验数据佐证

1. GFP转染效率时序图

图示为ExpiCHO-S细胞转染GFP荧光蛋白后D0~D3表达变化，小图为对应流式检测结果，体系最高转染效率＞90%。

2. 与PEI转染产量对比

高密度ExpiCHO培养体系中，本试剂盒抗体表达产量为PEI转染试剂的30倍。

四、产品核心优势

1. 超高重组蛋白产量

试剂、增强剂、补料协同增效，抗体表达滴度可达1–3 g/L；支持最高2×10⁷ cells/mL超高密度细胞培养。

2. 质粒用量少、细胞毒性低

仅需0.5–0.8 μg/mL质粒DNA，降低高浓度质粒引发的细胞应激；难表达、易聚集蛋白可进一步下调质粒用量优化结果。

3. 工艺线性可放大，重复性强

小试（1 mL）至中试（10 L）培养体系转染效果线性稳定，小试工艺可直接放大，批次差异小。

4. 三套收样方案按需选择

标准、高滴度、最高滴度3种培养方案，根据蛋白稳定性、表达难度灵活调整收获时间，兼顾实验周期与产物产量。

5. 操作简便，符合生物药申报规范

转染前细胞无需全换新鲜培养基，简化操作、降低污染风险；无血清、无动物源成分、化学成分限定，满足生物制药申报要求。

五、适用范围

1. 悬浮ExpiCHO-S细胞瞬时转染，用于单抗、融合蛋白、酶、细胞因子等重组蛋白表达；

2. 重组蛋白药物早期靶点筛选、分子构建筛选、小批量样品制备、表达工艺条件摸索；

3. 仅限ExpiCHO悬浮瞬时表达体系，不可用于贴壁CHO细胞稳定株构建。

六、试剂盒内含组分（1L规格）

组分名称	规格
ExpiFectamine™ CHO 转染试剂	3.2 mL
ExpiFectamine™ CHO 转染增强剂	6 mL
ExpiCHO 细胞补料液	330 mL

七、产品规格参数

参数项	参数内容
适配细胞系	ExpiCHO-S™、CHO-S、无血清驯化 CHO 细胞
产品属性	无动物源、化学成分限定、无蛋白、无血清
产品分类	ExpiFectamine 系列 CHO 瞬时转染试剂盒
转染原理	脂质体介导转染
配套载体推荐	pcDNA™ 3.4
适配培养体积	1 L 细胞培养体系
运输条件	室温运输
细胞类型	仓鼠卵巢悬浮细胞

八、1L培养体系标准操作流程

（一）实验前准备

1. 试剂回温

试剂盒全部组分、ExpiCHO培养基室温20–25℃自然回温，禁止37℃水浴；轻柔颠倒混匀液体，出厂无菌无需高压灭菌。

2. 细胞预处理

转染前1天传代ExpiCHO-S细胞，用ExpiCHO培养基稀释至3–4×10⁶ cells/mL，细胞活率≥95%；传代无需弃旧培养基，直接补新鲜培养基稀释。

3. 质粒要求

使用无内毒素质粒；抗体表达轻重链质粒推荐1:1混合，总质粒终浓度0.6–0.8 μg/mL；难表达蛋白可降至0.5 μg/mL，同步等比例减少转染试剂。

4. 标准培养条件

37℃、8% CO₂恒温摇床，摇瓶转速125–135 rpm。

（二）转染复合物配制（全程无菌，OptiPRO SFM稀释）

1. 质粒稀释：60 mL OptiPRO SFM + 600–800 μg质粒，轻柔混匀；

2. 转染试剂稀释：60 mL OptiPRO SFM + 3.2 mL ExpiFectamine CHO试剂，轻柔颠倒混匀；

3. 混合孵育：将稀释后转染试剂全部加入质粒稀释液，轻柔混匀，室温静置1–5 min（严禁超过5 min，防止复合物团聚失效）。

（三）转染与增强剂添加

1. 将质粒-转染复合物均匀滴加至1 L细胞培养液，轻摇混匀；

2. 转染后16–20 h，加入6 mL转染增强剂，充分混匀。

（四）补料与蛋白收获（3套标准方案）

转染第1天、第4天分两次添加补料液，每次165 mL，整瓶330 mL补料全部用完；不同方案收样时间：

1. 标准方案：转染后8–10天收上清，平衡周期与产量；

2. 高滴度方案：转染后10–12天收样，适用于绝大多数抗体；

3. 最高滴度方案：转染后12–14天收样，追求最大化蛋白表达量。

（五）实验收尾

1. 未用完试剂密封避光，放回2–8℃冷藏；

2. 收集上清后离心去除细胞沉淀，过滤保存蛋白样品；

3. 废弃细胞液、污染试剂按生物安全废弃物规范处理。

九、关键注意事项

1. 储存禁忌

转染试剂严禁冷冻；若意外冻存，2–8℃缓慢过夜解冻，无沉淀可试用，但厂家不保证转染效率，建议更换新品。

2. 质粒与试剂配比

下调质粒用量时，转染试剂必须同比例缩减；过量转染试剂会造成细胞大量死亡、表达量暴跌。

3. 细胞代次管控

ExpiCHO-S细胞累计传代≤20代；超20代后细胞增殖、转染效率显著下降，需复苏低代次冻存细胞。

4. 培养基兼容性

仅配套Gibco ExpiCHO™表达培养基（A2910001），混用其他品牌CHO培养基会破坏转染微环境，大幅降低蛋白产量。

5. 无菌操作要求

开封后全程无菌操作；液体浑浊、沉淀、变色直接废弃；转染复合物只能用OptiPRO SFM稀释，禁止直接用细胞培养基。

十、常见问题与解决方案

1. 转染后细胞活率快速下降

• 诱因：转染试剂添加过量、质粒含内毒素、细胞传代超20代；

• 解决：同步下调质粒与转染试剂用量，更换无内毒素质粒，使用低代次细胞。

2. 蛋白表达量极低

• 诱因：复合物孵育超过5 min、未按时添加增强剂/补料、转染前细胞密度偏离3–4×10⁶ cells/mL；

• 解决：严格控制复合物静置时间，按时添加Enhancer与Feed，转染前校准细胞密度。

3. 转染后细胞生长停滞/缓慢

• 诱因：培养基冷冻失效、培养箱CO₂偏离8%、摇床转速不足；

• 解决：更换合格未冻存培养基，校准CO₂浓度，摇瓶转速调整至125–135 rpm。

4. 是否可使用其他转染试剂转染ExpiCHO-S细胞？

试剂盒内转染试剂、增强剂、补料经过专属协同优化，转染效率与表达产量显著优于PEI等其他试剂；同等条件下本试剂盒蛋白产量为PEI的30倍，且质粒用量可减半。不推荐混用其他转染试剂。

5. 抗体轻重链质粒最佳配比

绝大多数抗体推荐重链:轻链=1:1；最优比例随抗体分子特性略有差异，建议以此比例为基础梯度优化。推荐将轻重链分别构建至pcDNA3.4载体后共转；单载体双顺反子（同时含轻重链）方案表达水平相近，可根据实验习惯选择。

6. 0.5–0.8 μg/mL低质粒浓度适配难表达蛋白吗？

本试剂转染效率高，低质粒浓度可降低细胞应激损伤；常规蛋白推荐0.6–0.8 μg/mL，易聚集、难表达蛋白可降至0.5 μg/mL，同时等比例减少转染试剂体积。

7. 稀释后转染试剂无法立刻与质粒混合如何处理？

将质粒直接稀释至「质粒+转染试剂稀释所需OptiPRO总容积」，再将未稀释的原液转染试剂直接加入质粒稀释液，轻柔颠倒混匀即可；适用于自动化高通量转染、小规模平行实验。

8. 优化质粒-转染复合物形成的操作要点

1. 使用低温OptiPRO SFM稀释质粒；

2. 稀释转染试剂后立即与质粒稀释液混合；

3. 轻柔颠倒/吹打1–2次混匀，禁止剧烈涡旋；

4. 复合物静置时间控制在30 s~5 min；

5. 禁止长时间存放稀释后的转染试剂或混合完成的复合物。

十一、储存及有效期

1. 储存温度：2~8℃避光冷藏，全程禁止冷冻；冷冻会破坏脂质体结构，直接导致转染失效；

2. 有效期：未开封产品按瓶身标签有效期使用；开封后建议4周内用完，避免性能衰减。