一、产品基础信息
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产品全称
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Gibco™ ExpiFectamine™ 293 Transfection Kit
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货号
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A14524
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品牌厂商
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Thermo Fisher Gibco
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产品体系
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Expi293™ 高通量蛋白瞬时表达系统专用脂质转染试剂盒
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产品级别
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非动物源性、化学成分明确、无蛋白、无血清
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适用对象
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Expi293F悬浮HEK293细胞高密度瞬时转染、重组蛋白、抗体、病毒载体高效表达制备
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保存
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在 2°C 至 8°C 下储存
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二、产品概述
ExpiFectamine™ 293 转染试剂盒是 Expi293™ 表达系统的一个核心组成部分。其设计用于 HEK（人胚肾）293 细胞高密度培养的瞬时转染。这种高效、阳离子、基于脂质的转染试剂和转染增强剂设计用于最大程度提高 Expi293™ 表达培养基中培养的 Expi293F™ 细胞中的蛋白表达水平
•专门设计用于使用提高转染性能和蛋白表达的匹配转染增强子转染高密度悬浮细胞培养物
•达到的蛋白得率是用于高密度 293 细胞培养的其他转染试剂的 2 至 10 倍
•使用通常用于当前低密度 293 混悬液培养系统的相同瞬时表达方案，以易于从低密度系统转为高产量、高密度 Expi293™ 表达系统
•提供稳健和可重现的转染结果，让用户对他们的结果更有信心
•将培养体积从小于 1 mL 扩大到大于 10 升，同时维持相等体积的蛋白得率
ExpiFectamine™ 293转染试剂盒专门设计用于在 Expi293™ 表达系统中与 Expi293F™ 细胞配合使用。该转染试剂盒由阳离子脂质 ExpiFectamine™ 293 试剂和 ExpiFectamine™ 293 转染增强子 1 和 2 组成。增强子在转染后 16 至 18 小时添加，用于增强转染、提高细胞活性和促进蛋白表达。使用 ExpiFectamine™ 293 转染组分的方案非常类似于其他瞬时表达试剂（如 293fectin™ 和 FreeStyle™ MAX）的转染方案。
三、试剂盒组分（A14524 标准套装）
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ExpiFectamine™ 293 试剂
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2.7 mL(3 x 0.9 mL)
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ExpiFectamine™ 293 转染增强剂1
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5 mL
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ExpiFectamine™ 293 转染增强剂2
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50 mL
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足以转染 1 L 培养物
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四、产品核心特点
1. 超高转染效率：适配高密度悬浮 Expi293F 细胞，转染效率可达 90% 以上，大幅提升重组蛋白表达产量。
2. 体系兼容性强：仅配套 Expi293 Expression Medium，无需血清，无血清体系背景低、纯化简单。
3. 工艺稳定可放大：支持小规模摇瓶至 10L 级生物反应器规模化放大，批次稳定性优异。
4. 低细胞毒性：优化脂质配方，转染后细胞活率高、生长期稳定，利于长效高表达。
5. 表达产量高：相较于传统 PEI、普通脂质体转染，蛋白表达量可提升数倍，是科研与工业级瞬时表达首选体系。
五、 典型应用场景
•重组抗体、细胞因子、酶类蛋白瞬时表达制备
•腺相关病毒 AAV、慢病毒包装辅助质粒转染
•膜蛋白、可溶性蛋白高通量表达筛选
•实验室研发、中试放大工艺、样品制备
六、储存条件与有效期
1. 储存温度：全程 2~8℃ 避光冷藏保存，禁止冷冻
2. 稳定性：未开封原厂储存，有效期稳定；开封后全程冷藏、避免光照、避免高温
3. 严禁操作：不可冻存、不可高温、不可剧烈摇晃、不可开盖久置
4. 试剂状态：正常为澄清透明液体，出现浑浊、沉淀、变色需直接报废
七、实验前置条件（必看）
7.1 推荐细胞与培养基
•细胞株：Expi293F 悬浮细胞
•配套培养基：Expi293 Expression Medium
•培养条件：37℃、8% CO₂、恒温摇床悬浮培养
7.2 转染最佳细胞状态
•转染当日细胞活率 ≥95%
•处于对数生长期、无结块、无污染
•转染工作密度：2.5×10⁶ cells/mL
7.3 质粒要求
•高纯度无内毒素质粒（OD260/280=1.8–2.0）
•无细菌、真菌、核酸酶污染
八、标准化转染操作流程（通用摇瓶工艺）
8.1 转染复合物配制
1. 提前将细胞调整至目标密度，摇匀备用。
2. 用新鲜 Expi293 基础培养基稀释质粒 DNA，轻柔混匀。
3. 单独稀释 ExpiFectamine 293 转染试剂，轻柔混匀。
4. 室温静置 5 min。
5. 将稀释后的转染试剂缓慢加入质粒稀释液中，轻柔颠倒混匀。
6. 室温避光静置 10–20 min，形成脂质 - 质粒复合物。
8.2 加样转染
将复合物混合液均匀滴加至细胞培养液中，轻轻摇匀，放回摇床正常培养。
8.3 增强剂添加（关键步骤）
•转染后 18~22 h，加入 Transfection Enhancer 1
•同步或按工艺比例加入 Transfection Enhancer 2（终浓度 6% 体系比例）
增强剂可显著降低细胞应激、提升细胞活率、大幅提高最终蛋白表达产量。
8.4 后续培养与收样
•全程 37℃、8% CO₂悬浮培养
•根据蛋白表达特性，转染后 48~72 h 或 96 h取样收液、收细胞
•全程保持良好通气、摇速稳定、不结团
九、关键操作注意事项
1. 禁止冻存：整套试剂必须 2–8℃冷藏，冻存会直接导致脂质失效、转染完全失败。
2. 禁止剧烈震荡：脂质试剂易起泡、结构破坏，仅轻柔颠倒混匀。
3. 必须配套专用培养基：不可用普通 293 培养基、DMEM、无配套培养基会严重降低表达量。
4. 细胞状态决定产量：活率低于 90%、抱团、老化细胞不建议转染。
5. 增强剂添加时间严格把控：过早 / 过晚添加均会影响最终产量。
6. 所有操作无菌、无核酸酶污染，避免质粒降解、转染失效。
十、常见问题与解决方案
1. 转染效率低、表达量低
原因：细胞密度不当、细胞老化、质粒不纯、复合物静置时间不足
对策：使用对数生长期高活率细胞、高纯度内毒素质粒、严格遵守孵育时间
2. 转染后细胞大量死亡
原因：复合物浓度过高、增强剂添加异常、培养环境不稳
对策：按标准比例操作，检查 CO₂浓度、摇速、温度
3. 蛋白表达不稳定、批次差异大
对策：统一细胞传代标准、统一转染时间、统一增强剂添加窗口
4. 我所制备的DNA–ExpiFectamine 293转染复合物的放置时间超过了20分钟。它们还能用吗？
新鲜制备的转染复合物所获得的转染效率最佳。不过，这些复合物在至少一小时之内保持稳定。
5. 我需要一款不含动物源性成份的表达系统，我能使用OptiPROSFM来替代Opti-MEM I低血清培养基配制DNA–ExpiFectamine 293转染复合物吗么？
我们不推荐用户使用OptiPRO SFM来配制DNA–ExpiFectamine 293转染复合物。如果您需要一款不含动物源性成份的表达系统，您可使用FreeStyle 293表达培养基来制备转染复合物，但请注意这一操作会导致最终的蛋白得率下降10-20%。
6. 培养于FreeStyle 293表达培养基中的FreeStyle 293-F细胞能使用ExpiFectamine293试剂和增强剂进行转染吗？如果可以，转染效率会比使用FreeStyle Max试剂更高吗？
您可使用ExpiFectamine293试剂来转染FreeStyle 293表达培养基中培养的FreeStyle 293-F细胞；不过，增强剂只会对蛋白表达提供少许的促进作用，因为这一产品是针对更高密度培养设计的，而FreeStyle 293表达培养基并不适用。
7. DNA–ExpiFectamine 293转染复合物的稳定性如何？
新制备的转染复合物所获得的转染效率最佳。不过，这些复合物可在至少一小时之内保持稳定。
8. 在使用Expi293表达系统的过程中，我应等待多少天后收获蛋白？
最佳的表达时间随不同的目的蛋白而发生变化，但大多数测试蛋白的最佳表达时间窗为3-7天。由于本系统具有良好的扩展性，我们推荐您可在放大扩种之前进行一个小规模测试实验，来决定何时收获目的蛋白。
北京
