一、产品基础信息
1.1 产品基本参数
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产品名称
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Gibco™ Expi293™ Expression Medium
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货号
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A1435101
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规格
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1L / 瓶
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品牌
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Gibco（Thermo Fisher 赛默飞）
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产品形态
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无菌液体培养基
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产品属性
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非动物源性, 化学成分明确, 无蛋白, 无血清
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运输条件
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室温
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1.2产品概述
Gibco Expi293 表达培养基是一种化学成分确定、无血清、无蛋白的培养基，用于培养和转染悬浮的人胚肾 (HEK) 293 细胞。此培养基是 Expi293 表达系统的核心组成部分，专门用于在系统中进行高密度的 Expi293F 细胞培养，以实现可扩展的瞬时蛋白表达。
•支持悬浮 293 培养物生长直至密度超过 1.5 x 10^7 个细胞/mL
• 该无血清悬浮培养基兼容转染，与 ExpiFectamine 转染试剂配合使用时，转染效率超过 70%
• 能够持续、高水平、高密度地进行瞬时蛋白表达，重组蛋白产量高达 1 g/L
•支持 293 细胞在各种培养规模下（从多孔板中的不到 1mL 到一次性生物反应器中的大于 10L）的生长和转染
• 不含酚红
Expi293 表达培养基含有 GlutaMAX-I 。可直接使用，无需添加剂。化学成分确定的配方可实现高度的重复性和批间可靠性。Expi293 表达培养基不含人源性或动物源性成分。不推荐将此培养基用于贴壁细胞培养。
1.3 核心产品优势
1. 体系稳定，重复性高：完全化学成分确定配方，无动物源组分、无蛋白、无水解物，从根源降低外源污染风险，批次间差异极小，保障实验数据稳定可重复。
2. 支持细胞高密度增殖：可支撑 Expi293F 悬浮细胞高密度生长，细胞密度最高可达 15×10⁶ cells/mL，大幅提升细胞培养产能。
3. 转染效率高、蛋白产量优：与 ExpiFectamine™ 293 转染试剂盒高度适配，瞬时转染效率优异，重组蛋白最大表达产量可达 1g/L，满足科研及小批量制备需求。
4. 工艺兼容性强，可线性放大：适配多场景培养体系，可从多孔板小体积培养，直接放大至摇瓶、搅拌式一次性生物反应器，无需重新驯化细胞、优化工艺。
5. 操作简便高效：成品无菌液态培养基，无需自行配制、过滤除菌，37℃预热后即可直接使用，大幅简化实验操作流程。
1.4 适用应用场景
1. Expi293F 悬浮细胞的日常维持、扩增培养；
2. HEK293 悬浮细胞瞬时转染实验；
3. 重组蛋白、抗体的瞬时表达与纯化制备；
4. 结构生物学研究、抗原制备、科研级蛋白小试生产。
二、产品储存与保质期
2.1 储存条件
密封置于2~8℃避光冷藏保存，严禁冷冻。冷冻会导致培养基有效组分析出、活性失效，彻底丧失使用性能；同时需避免长期光照，光照会造成营养组分降解，影响培养效果。
2.2 保质期说明
1. 未开封原厂状态：保质期 12 个月（以产品外包装生产日期为准）；
2. 开封后使用规范：建议无菌分装保存，避免整瓶反复开合、室温久置，开封后最优使用周期为 1 个月，超时不建议用于转染及高要求蛋白表达实验。
2.3 质量筛查标准
使用前需目视检查培养基，出现浑浊、沉淀、絮状物、颜色异常加深、污染异味等情况，立即废弃，禁止用于细胞培养实验。
三、标准使用操作说明
3.1 使用前预处理
1. 提前将 2~8℃冷藏的培养基取出，放入 37℃恒温水浴锅预热，全程轻柔颠倒混匀，禁止剧烈摇晃，避免产生大量气泡影响细胞生长；
2. 在超净工作台内核对产品完整性、澄清度，确认无污染、无沉淀后备用；
3. 全程严格遵循细胞房无菌操作规范，所有器具提前灭菌处理。
4. 重要禁忌：本培养基已含稳定谷氨酰胺，禁止额外添加 L - 谷氨酰胺。
3.2 Expi293F 细胞维持培养操作
1. 培养环境参数：恒温 37℃、8% CO₂、饱和湿度≥80%；
2. 摇床转速标准：25mm 偏心距摇床 120–145rpm；50mm 偏心距摇床 90–110rpm；
3. 传代接种密度：常规传代接种密度 0.3–0.5×10⁶活细胞 /mL；
4. 传代时机：细胞生长至 3–5×10⁶活细胞 /mL 对数生长期时及时传代，常规培养周期 3–4 天，维持细胞整体活力≥95%；
5. 补充说明：本培养基仅用于细胞培养扩增，不可直接作为细胞冻存液使用，细胞冻存需搭配专用冻存液体系。
3.3 瞬时转染实验操作要点
1. 细胞状态要求：转染当日调整细胞密度至 2.0×10⁶–2.5×10⁶活细胞 /mL，细胞活力需≥98%，保证转染效率；
2. 配套试剂推荐：专属配套 ExpiFectamine™ 293 转染试剂盒（货号：A14524）；
3. 核心操作工艺：本系统为免换液体系，转染操作完成后无需弃液、补液，直接持续培养 5–7 天，即可收集细胞上清提取目的蛋白；
4. 抗生素使用建议：常规蛋白表达体系不推荐添加抗生素，抗生素会抑制细胞活性、降低蛋白表达量，仅高污染风险环境可微量酌情添加。
四、关键使用注意事项
1. 适用细胞限定：仅适配悬浮驯化 Expi293F 细胞，禁止用于贴壁 293 细胞培养；其他 293 悬浮细胞株需提前驯化后方可试用，不可直接使用；
2. 培养容器装液规范：摇瓶培养工作体积不得超过摇瓶总体积的 40%，保证充足溶氧，避免细胞缺氧凋亡；
3. 操作防护规范：水浴预热时避免瓶盖浸泡入水，防止水体微生物污染培养基；
4. 环境要求：全程避光培养、避光储存，杜绝光照导致的组分降解失效。
五、常见问题解答
1. 问：使用该培养基是否需要额外添加谷氨酰胺？
答：不需要。 培养基预添加 GlutaMAX™稳定型谷氨酰胺，稳定性更强、降解速度更慢，无需人工补加。
2. 问：转染结束后是否需要更换新鲜培养基？
答：不需要。 Expi293 瞬时表达系统为免换液工艺，转染后直接培养至收获周期即可，换液反而会影响蛋白表达效率。
3. 问：培养基能否冷冻保存延长保质期？
答：绝对不能。 冷冻会破坏培养基营养体系，导致组分析出、培养基失效，只能 2–8℃冷藏避光保存。
4. 问：我能使用ProBond或Ni-NTA纯化系统来纯化Expi293表达培养基中的目的蛋白吗？
答：Expi293表达培养基并不直接兼容ProBond或Ni-NTA纯化系统。我们推荐在用His标签的纯化操作之前进行一次缓冲体系交换或样本透析。
5. 问：我能在Expi293表达系统中使用另外一种293细胞系吗？
答：大多数293细胞系均能适应从传统含血清或其它无血清培养基向Expi293表达培养基中的切换按照手册中所描述的直接切换法或序贯切换法来操作，大多数293细胞系均能适应从传统含血清或其它无血清培养基向Expi293表达培养基中的切换。 注意：切换后的细胞可能无法达到与Expi293F细胞同等的高水平表达。
6. 问：你们推荐在Expi293表达系统中使用何种载体？
答：我们推荐使用pcDNA 3.4-TOPO TA载体（货号A14697）。这一载体含有天然的全长CMV启动子和克隆位点下游的WPRE（旱獭转录后调控元件），这两个元件均有利于基因的高水平表达（表达比pcDNA3.3 TOPO载体高大约2-3倍，而后者又比标准的pcDNA载体高2-5倍）。当然，实际表达水平还要视具体蛋白而定。
7. 问：Expi293表达系统中完全非动物源性的（AOF）么？
答：除了Opti-MEM I低血清培养基为无血清但不是非动物源性的外，本系统中的其余成份均为非动物源性的，请参考应用说明: 在非动物源性的条件下使用Expi293表达系统。
8. 问：我希望能够通过哺乳动物表达系统获得极高的蛋白得率。你们可以提供哪些系统？
答：我们为蛋白的稳定高产量生产提供Freedom CHO-S与Freedom DG44试剂盒。我们为瞬时高产量生产提供ExpiCHO表达系统，Expi293表达系统，FreeStyle 293 表达系统，FreeStyle Max 293表达系统和FreeStyle Max CHO表达系统。如需在Exp293F细胞中高效表达功能性膜蛋白，我们还提供了Expi293 MembranePro 表达系统（货号A25869，A25870），这款产品将Expi293的扩展性/易用性与MembranePro技术整合起来，能够将膜蛋白的表达产量大大提升，超出标准贴壁培养的MembranePro功能性蛋白表达系统的表达产量20倍以上。
北京
