CELLiGENT 3D 细胞培养基质胶套装

Catalog No. CG0201-2、CG0201-4、CG0201-10
Specification 2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit Storage 4℃保存、 保存两年

一、产品描述
CELLiGENT 3D 细胞培养基质胶套装包含整套胶体与试剂，可 3D 细胞培养与微环境应用等；本试剂盒操作便利且可调控基质胶硬度进行多种细胞培养测试；高分子胶体可快速形成水凝胶， 建议操作此培养胶体前详读此使用指南。
（CELLiGENT 3D 细胞培养基质胶套装为植物来源，无动物成分）

二、应用

· 三维细胞球体培养试验

· 适合用于三维细胞药物筛检平台

三、样本类型

· 肿瘤细胞系

四、试剂盒组分

五、使用步骤：

A.试剂制备
A 基质胶：将A 基质胶溶于 37℃水浴槽回温 10 分钟， 确认完全融解.
C 缓冲溶液(1X)制备：使用前将 10X C 缓冲溶液用冰的无细胞培养液(例如： 无血清 DMEM、opt-MEM) 制备成 1X C 缓冲溶液。(不要用 PBS 稀释 C 缓冲液) .
D 缓冲溶液(1X)制备: 使用前用冷的 1x PBS 稀释 10X D 缓冲溶液至 1X D 缓冲溶液.

B. CELLiGENT 3D细胞培养基质胶的制备

   全部步骤需要在无菌环境内操作，操作步骤如下：

1. 将 24孔培养板放置于冰上预冷。

2. 细胞计数后取 2×105~2×107 细胞与 0.5 毫升 37℃ 细胞培养基均匀混合，并与 0.5 毫升 37℃ A 胶按照 1:1 等比例均匀混合，最终细胞密度 105~107cells/mL。注：请选择适当的培养溶液与条件进行试验。

3. 取 20-40 微升步骤 2 的混合液滴于 步骤 1 预冷的培养板上，胶体将于 5 分钟内成胶。 注: 测试胶体是否成胶，可用微量吸管尖温和的触碰胶体表面进行确认。

4. 待胶体成胶后，添加 1 毫升冰的 1X C 缓冲溶液，并盖过步骤 3 的胶溶液，固定 15 分钟。

5. 待 15 分钟固定后，小心的吸取 C 缓冲溶液并置换为适合此细胞生长之培养基溶液。

6.  将含有细胞的胶于 37°C 二氧化碳培养箱内进行 7~14 天的培养，并观察细胞球体的形成，按正常培养基更换频率进行更换操作。

C、溶胶与收集细胞球体准备程序
      小心的将培养基吸取移除，并用 1X PBS 进行清洗。小心的将 1X PBS 吸取移除，并添加 1 毫升冰的 D 缓冲溶液，盖过胶滴于室温反应 5 分钟。温和的用 1 毫升移液管吸取，直到胶滴完全溶解。将含有细胞球体的溶液吸入 1.5 毫升离心管，用 1000 rpm 的转速离心 10 分钟，移除上清液体并收集细胞球体做分析。

D、收集单颗细胞准备程序

      在分离单细胞前，先按上述溶胶与收集细胞球体准备程序进行操作

1. 添加 trypsin-EDTA 并与收集的细胞球体于 37°C 混合反应。

2. 用 1 毫升移液管混合，直到细胞体完全分解。

3. 待细胞球体完全分解，加入 3 倍体积的 1X PBS，并用 1000 转的转速进行离心 10 分钟，并移除上清液体收集沉淀的单细胞做分析。