lipo2000操作方法
发布时间:2013-7-8
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使用Lipofectamine 2000转染Stealth RNA或者进入哺乳动物细胞时,遵从以下一般性指导:

1 为了获得最佳基因阻断结果,每一种细胞系转染StealthRNA或者siRNA的量都需要经过实验确定。如果您是首次转染您的细胞系,推荐尝试使用几个Lipofectamine2000的浓度,并在20-100nM范围内改变StealthRNA或者siRNA的浓度,以确定达到最佳基因阻断水平所需要的条件。高浓度的StealthRNA或者siRNA可能具有细胞系依赖性。注:我们推荐开始时使用40nM Stealth RNA或者。

2 30-50%细胞汇合度时进行转染。通常基因阻断的分析至少要在转染后24-72小时进行。低密度转染细胞可以使转染和分析之间更长的间隙更长,从而使由于细胞过度生长造成的细胞活性损害减少到最低。根据靶基因的特性,高密度转染的细胞可能更加适合条件的优化。

3 不要在转染时的培养基中加入抗生素,因为这将会降低细胞转染的效率和导致细胞死亡。

4 为了获得更好的结果,可以使用Opti-MEM® I 低血清培养基(目录号31958-062)在形成复合物前稀释Lipofectamine2000Stealth RNA或者寡聚物。

5 可以使用invitrogen BLOCK-iT™荧光寡聚物(BLOCK-iT™ Fluorescent Oligo)(目录号 2013)帮助优化细胞系的转染条件。一旦确定了用来转染的最佳条件,在每一次实验都包括BLOCK-iT™荧光寡聚物,作为转染效率的指示剂。如果需要的更多的信息,请参阅BLOCK-iT™荧光寡聚物说明书,说明书可以通过我们的网站下载或者通过拨打技术服务热线。 

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