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  • 产品名称:Annexin V,FITC 凋亡检测试剂盒
  • 产品货号:AD10
  • 产品规格:50T
  • 产品品牌:Takara
  • 供应商:
  • 产品产地: 日本 产品价格:¥960
  • 产品说明书:
  • 保存于运输说明:
  • 0-5℃避光 (切勿冻存)
  • 详细信息:
  •  

     

    产品详细描述

     试剂盒内含:Annexin V,FITC结合物,PI Solution,10×Annexin V Binding Buffer

    储存条件:0-5℃,避光 (切勿冻存)
    运输条件:室温
    产品描述:细胞凋亡是指为维持有机体内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。正常情况下任何细胞在形成过程中发生的异常都会通过凋亡消除。例如体内的癌细胞增长为肿瘤的过程会受细胞凋亡的引导而被抑制。然而在抑癌基因p53出现问题时,凋亡就不会诱导发生,从而导致癌细胞的不断增长。细胞凋亡可以通过细胞形态的变化或生物化学的变化来检测。目前常用的指标有caspase活性变化、DNA碎片、***脂酰丝氨酸的外翻等。
      Annexin V染色的细胞可以用于检测细胞凋亡早期的细胞膜变化。在细胞凋亡早期,膜***脂酰丝氨酸由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35-36 kD的Ca2+依赖性***脂结合蛋白,与***脂酰丝氨酸有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的***脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜特异性结合,因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。用绿色荧光FITC标记的Annexin V通过流式细胞仪或荧光显微镜可以检测到细胞凋亡的发生。***化丙*** (Propidium Iodide, PI) 是一种核酸染料,PI只能透过凋亡晚期和死细胞的细胞膜,因此Annexin V和PI结合使用,可以区分凋亡早晚期的细胞及死细胞。

    产品详细描述

     试剂盒内含:Annexin V,FITC结合物,PI Solution,10×Annexin V Binding Buffer

    储存条件:0-5℃,避光 (切勿冻存)
    运输条件:室温
    产品描述:细胞凋亡是指为维持有机体内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。正常情况下任何细胞在形成过程中发生的异常都会通过凋亡消除。例如体内的癌细胞增长为肿瘤的过程会受细胞凋亡的引导而被抑制。然而在抑癌基因p53出现问题时,凋亡就不会诱导发生,从而导致癌细胞的不断增长。细胞凋亡可以通过细胞形态的变化或生物化学的变化来检测。目前常用的指标有caspase活性变化、DNA碎片、***脂酰丝氨酸的外翻等。
      Annexin V染色的细胞可以用于检测细胞凋亡早期的细胞膜变化。在细胞凋亡早期,膜***脂酰丝氨酸由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35-36 kD的Ca2+依赖性***脂结合蛋白,与***脂酰丝氨酸有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的***脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜特异性结合,因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。用绿色荧光FITC标记的Annexin V通过流式细胞仪或荧光显微镜可以检测到细胞凋亡的发生。***化丙*** (Propidium Iodide, PI) 是一种核酸染料,PI只能透过凋亡晚期和死细胞的细胞膜,因此Annexin V和PI结合使用,可以区分凋亡早晚期的细胞及死细胞。
    操作流程:
    -悬浮细胞的操作流程
    诱导凋亡的操作步骤
    1.制备细胞 (Jurkat cell) 悬液 (1×106
     cells/ml)
    2.加入终浓度为1 μg/ml的凋亡诱导剂 (Staurosuporine)
    3.在37℃下培养3.5 h。
    * Staurosuporine用于诱导Jurkat cell凋亡。最佳诱导条件请根据实验的细胞类型与诱导剂调整。
    Annexin V染色操作步骤
    1. 将细胞悬液转移到离心管中,1,000 rpm离心3 min, 去除上清液。
    2. 加入PBS,1,000 rpm离心 3 min,去除上清液。再重复本步操作一遍。
    3. 用之前准备好的1×Annexin V Binding Solution制备细胞终浓度为1×106cells/ml的细胞悬液
     细胞悬液体积根据实验目的自行调整,一般推荐不少于500 μ l细胞悬液
    4. 取100 l步骤3中制备的细胞悬液,加入到一个新的tube中。
    5. 向细胞悬液中加入5 μl Annexin V,FITC结合物,再加入5μl PI Solution。
    6. 室温下避光培养15 min。
    7. 加入400 μl 1×Annexin V Binding Solution,请在1 h内检测。
    -贴壁细胞的操作流程
    诱导凋亡的操作步骤
    1. 制备细胞 (Caco-2) 悬液 (1×106 cells/ml)  将细胞悬液接种到培养皿或者培养板中。
    2. 在5% CO2培养箱中37℃预培养。
    3. 加入终浓度为25 μmol/ml的凋亡诱导剂 (Cisplatin)。
    4. 37℃培养4 days。
    Annexin V染色操作步骤
    1. 吸取培养皿或培养板中的上清液丢弃或转移至微型 管中保存。
    2. 用PBS洗细胞2次,丢弃或收集清洗液保存。
    3. 用胰蛋白酶消化细胞。 
    4. 用适量的培养基或PBS将细胞悬液转移至离心管中,如果第一步的上清液和第二步的清洗液没有丢弃, 可以一并加入。
    5. 1,000 rpm离心3 min,弃上清。
    * Cisplatin用于诱导Caco-2 cell凋亡。最佳的诱导条 件请根据实验的细胞类型与诱导剂调整
    6. 加入PBS后1,000 rpm离心3 min,弃上清。重复本 步操作一遍。
    7. 加入预先配好的1×Annexin V Binding Solution,制成终浓度为1×106cells/ml的细胞悬液。
    * 细胞悬液体积根据实验目的自行调整,一般推荐不 少于500 l细胞悬液。
    8. 取100 μll步骤7中的细胞悬液,加入到新的tube中。
    9. 向细胞悬液中加入5 μl Annexin V, FITC结合物,再 加入5 μl的PI Solution。
    10. 室温下避光培养15 min。
    11. 加入400 μl 1×Annexin V Binding Solution,请在 1 h内检测。
    备注:1. 上清液及清洗液中可能含有细胞或凋亡细胞,可 以收集一起处理。
     2. 离心后如果无法判断tube中是否含有细胞?可以保留上清液,以防检测时没有细胞,进而得不到实验结果。
    -设定对照
    1. 未染色细胞。
    2. Annexin V, FITC染色细胞 (没有PI)。
    3. PI染色细胞 (没有Annexin V-FITC)。
    -流式细胞仪检测
    1. 加样到流式细胞仪检测,激发波长Ex = 488 nm;发 射波长Em = 530 nm。
    2. Annexin V-FITC的绿色荧光通过FITC通道 (FL1) 检 测;PI的红色荧光通过PI 通道 (FL2或FL3) 检测 (建议使用FL3)。
    注意事项:
    1. PI有潜在的致癌性,操作时请特别注意并采取必要的 防护措施。
    2. Annexin V,FITC和PI均对光敏感。所有染色过程和培养过程均需避光。
    3. 若细胞收集过程中使用胰酶,需设法去除残留的胰酶,这些胰酶会消化并降解Annexin V, FITC,最终导致染 色失败。

    储存条件 :0-5℃,避光 (切勿冻存)

    运输条件:室温
    产品描述:细胞凋亡是指为维持有机体内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。正常情况下任何细胞在形成过程中发生的异常都会通过凋亡消除。例如体内的癌细胞增长为肿瘤的过程会受细胞凋亡的引导而被抑制。然而在抑癌基因p53出现问题时,凋亡就不会诱导发生,从而导致癌细胞的不断增长。细胞凋亡可以通过细胞形态的变化或生物化学的变化来检测。目前常用的指标有caspase活性变化、DNA碎片、***脂酰丝氨酸的外翻等。
      Annexin V染色的细胞可以用于检测细胞凋亡早期的细胞膜变化。在细胞凋亡早期,膜***脂酰丝氨酸由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35-36 kD的Ca2+依赖性***脂结合蛋白,与***脂酰丝氨酸有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的***脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜特异性结合,因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。用绿色荧光FITC标记的Annexin V通过流式细胞仪或荧光显微镜可以检测到细胞凋亡的发生。***化丙*** (Propidium Iodide, PI) 是一种核酸染料,PI只能透过凋亡晚期和死细胞的细胞膜,因此Annexin V和PI结合使用,可以区分凋亡早晚期的细胞及死细胞。
     
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